Küsimus:
Kuidas lõhustate rakkude tükke läbimisel?
Rob O'Callahan
2011-12-22 07:55:37 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Ma töötan HepG2 rakkudega ja neile meeldib väga klompe moodustada. TrypLE'is üles ja alla pipetamine ei tundu nende lõhkumisel kuigi tõhus.

Rob: kas Google saab sellele küsimusele vastata? Kui võimalik, tulge tagasi ja postitage oma küsimusele vastus. Siin on vihje: http://hepg2.com/index.html
Kolm vastused:
#1
+5
Jeremy
2012-01-17 09:40:10 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Leian, et mul tekivad tükid (koos HeLa ja sarnaste rakutüüpidega) ainult siis, kui jätan need Tryple'i liiga kauaks. Üldiselt jätan nad toatemperatuuri (mitte kuuma) Tryple juurde ~ 8 minutiks, siis kalden nõude, kaas maha, et näeksin tassi rakkude "läike" (see juhtub muidugi kapuutsis) ). Seejärel lasin Tryple'iga läike läbi, kasutades 1000 ul pipetti, mis rakkude küljest kinni võtab. Need on tavaliselt palju vähem tükeldatud kui siis, kui laseksin Tryple rakkudest lahti kleepida.

#2
+3
kasia
2012-01-15 19:52:12 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Mõnes primaarkultuuri loomise protokollis (näiteks hiire luuüdist või roti endomeetriumist) on samm, mis nõuab klompidest vabanemiseks rakususpensiooni surumist läbi suure nõela. Muidugi, sellega kaasneb suur oht rakke kahjustada, nii et mõnikord kasutatakse selle asemel kollagenaasi.

Samuti võib olla kasulik enne rakkude pesemist rakke pesta IBS-iga ja kasutada tripiini koos EDTA-ga. See peaks plaadilt vabanema vähemalt mõnest kaltsiumist, et adhesioonivalkude toime pärssiks.

#3
+3
Valentinos
2012-02-17 21:28:23 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Rakupaketid, mis ei lahku range pipeteerimisega, võivad väga hästi olla põhjustatud teie rakususpensioonis olevast vabast DNA-st (st kui te olete liiga kaua trüpsiininud). Vaba DNA meelitab rakke, mis seonduvad täielikult, moodustades tükke.

Kaks võimalikku viisi nendest klompidest vabanemiseks:

  1. Tsentrifuugige rakususpensiooni kiirusega 2 minutit kiirusel 5000 pööret minutis. (4 juures) ja pidurdada (3), võimaldades raskemate molekulide sadestumist. Seejärel aspireerige suspensiooni ülaosast ~ 0,5 ml ja viige uude kolbi. Vajadusel korrake seda.
  2. Kasutage DNAse kontsentratsioonis 20–100 µg / ml (kontsentratsioon tuleneb isiklikust kasutamisest), kui te ei kavatse DNA-ga seotud katseid läbi viia.

Võite alati tagasi minna ja osta uue rakuliini ampulli, mille soovite klompideks vabastada :)



See küsimus ja vastus tõlgiti automaatselt inglise keelest.Algne sisu on saadaval stackexchange-is, mida täname cc by-sa 3.0-litsentsi eest, mille all seda levitatakse.
Loading...