Küsimus:
mida tähendab VIP-cre :: LSL-TOM :: SOMGFP (GIN) hiired?
user135172
2017-05-18 15:13:43 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Loen järgmist paberit ja teadlased kasutavad

"VIP-cre :: LSL-TOM :: SOM-GFP (GIN)"

hiired (lehekülg 4) mitme lahtriga plaastri klambri jaoks ja

"VIP-cre :: LSL-TOM ja SOM-cre :: LSL-TOM"

hiirtele, kellele süstiti AAV1 kahe footoni kaltsiumkujutise jaoks.

Olen püüdnud seda veebis otsida. Mõistan näiteks, et AAV1 on insener-viirus ja et CaMKII on promootor, et TOM on punane fluorestseeruv valk, GCaMP on loodud rohelise fluorestseeruva valgu sulandumisel teiste peptiididega jne.

Siiski on mul keeruline tükke kokku panna ja aru saada "VIP-cre :: LSL-TOM :: SOMGFP (GIN)" (ja teiste hiirtüüpide memtiond) kogu tähendus.

Näiteks:

  1. Võtke VIP-Cre hiir. Kas see tähendab, et selle hiire iga VIP neuron sisaldab selle DNA-s Cre-järjestust?

  2. Kuidas on lood teiste neuronitega, kas need võivad sisaldada ka Cre-d?

  3. Kui nad süstivad AAV1 viirust VIP-cre'i: LSL-TOM hiired, kas see tähendab, et kõik neuronid saavad viiruse? sealhulgas VIP ja SOM neuronid?

  4. Oletame, et mul on hiir "VIP-cre :: LSL-TOM :: SOM-GFP (GIN)". Ma saan aru, et VIP lahtrid värvitakse punaseks ja SOM lahtrid roheliseks. Miks on VIP-rakkudel vaja Cre promootorit ja SOM-rakkudel seda pole? sobiva viite juurde. Vaatasin palju, kuid minu poolt leitud viited on laboriviited koos tehniliste üksikasjade ja numbritega. Ma ei leidnud selle hiirtüübi jaoks midagi konkreetset, mis sisaldaks selgitusi.

    Aitäh !!

    enter image description here

üks vastus:
akaDrHouse
2017-05-18 18:18:55 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Ma arvan, et saan aidata selgitada kõiki, välja arvatud teie kolmas küsimus.

  • Transgeensel hiirel on geneetiline konstrukt tavaliselt kõigis rakkudes. Kui te ei saa kimäärset looma, keda hiire valmistamise ajal skriinitakse.
  • VIP :: Cre tähendab, et VIP promootorit kasutati Cre rekombinaasi kodeeriva DNA piirkonna ees. Pange tähele, et loomal on endiselt endogeenne VIP-geen, mis muudab VIP-i. See on täiendav konstruktsioon. Sellise süsteemi eesmärk on piirata Cre rekombinaasi ekspressiooni ainult rakkudega, mis ekspresseeriksid ka VIP-d.
  • LSL tähistab Lox-Stop-Lox kassetti. LSL: TOM on geen, mis kodeerib ennetähtaegse peatumisega tomatipunast valku, nii et see ei tekita kunagi õiget valku (ja punast pole).
  • Kui Cre ekspresseeritakse LSL-iga rakus -TOM-konstrukt, see rekombineerib LSL ja eemaldab stoppkoodoni, võimaldades seeläbi luua funktsionaalse tomatipunase transkripti ja fluorofoori (valk). Jällegi on see konstruktsioon KÕIKIDE rakkude DNA-s, kuid rekombinatsiooni sündmus (ja sellele järgnev funktsiooni TOM ekspressioon) toimub ainult rakkudes, mis ekspresseerivad ka Cre rekombinaasi. Ja VIP :: CRE hiire puhul juhtub see ainult VIP-i lahtrites.

Teie küsimused:

1) Tegelikult on kõik lahtrid loomal on VIP :: Cre (välja arvatud loomulikult veri või sugurakud, mis said meioosi ajal mitte-transgeense alleeli. Selle põhjuseks on asjaolu, et tavaliselt hoitakse kreemide geene Hetsis hiire paaritumise ajal).

2) Kõik neuronid (ja kõik rakud; vt vastust 1) sisaldavad geneetilist konstruktsiooni VIP :: CRE. Kavatsus on hiirel VIP :: CRE, Cre rekombinaasi ekspresseerivad ainult VIP-i ekspresseerivad rakud. See tähendab, et ka teised keha VIP-d väljendavad koed peaksid fluorestseerima VIP :: CRE / LSL-TOM hiirel. Kõrvalepõikena peaksid kõik rakud, mis tavaliselt teevad SOM-i, samuti tegema GFP-d SOM :: GFP-hiires, kuid kõigil rakkudel on DNA-transgeen.

3) See küsimus on väljaspool minu teadmisi. Ma olen teinud palju tööd transgeensete hiirtega, kuid peale selle, et uurisin, et sellel viirusekonstruktsioonil on midagi pistmist kaltsiumi ja neuronite pildistamisega, pole ma kindel.

Per Bryan Krause: "... eeldatakse, et see nakatab kõige rohkem, kui mitte kõiki rakke, isegi mitte ainult neuroneid, kuid kasutab neuronispetsiifilist" sünapsiini "promootorit (kuid ekspresseeritakse nii VIP- kui SOM-rakkudes, samuti muudes neuronitüüpides). Arvatavasti kasutavad autorid kaltsiumkujutisi aktiivsuse tuvastamiseks kogu segapopulatsioonis, kuid seejärel kasutavad tdTomatot ühe või teise alampopulatsiooni tuvastamiseks, sõltuvalt looma kasutatakse. "

4) VIP-cre :: LSL-TOM :: SOM-GFP (GIN) jaoks. Nagu kirjutatud, tähendaks see seda, et Cre ekspresseerimine on vajalik tomatipunase transkriptsiooni ja kodeerimise aktiveerimiseks VIP ekspresseerivates rakkudes. Kuid see GFP on juba aktiivne SOM-is, mis ekspresseerivad rakke juba arengu esimesest päevast.

Mõningaid Cre-Loxi süsteemide kasutusviise on illustreeritud siin. See veebisaidi pilt näitab graafiliselt, mis toimub LSL-konstruktsiooniga. enter image description here

Teie süsteemis on laczi asemel tomatipunane ja sihitud süsteemina kasutatakse VIP-ekspresseerivaid lahtreid.

(3) eelduseks on, et see nakatab kõige rohkem, kui mitte kõiki * rakke *, isegi mitte ainult neuroneid, kuid see kasutab neuronile spetsiifilist (aga ekspresseeritavat nii VIP- kui ka SOM-rakkudes) sünapsiini promootorit, samuti muud neuronitüübid). Arvatavasti kasutavad autorid kaltsiumipilti, et tuvastada aktiivsust kogu segapopulatsioonis, kuid seejärel kasutavad tdTomatot ühe või teise alampopulatsiooni tuvastamiseks, olenevalt sellest, millist looma kasutatakse.


ⓘ
See küsimus ja vastus tõlgiti automaatselt inglise keelest.Algne sisu on saadaval stackexchange-is, mida täname cc by-sa 3.0-litsentsi eest, mille all seda levitatakse.
Loading...